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胰蛋白酶
胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種，EC3.4.21.4,。在脊椎動物中,，作為消化酶而起作用。在胰臟是作為酶的前體胰蛋白酶原而被合成的,。作為胰液的成分而分泌,，受腸激酶,，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶，是肽鏈內(nèi)切酶,，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷,。它不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原,、羧肽酶原,、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用,。是特異性最強(qiáng)的蛋白酶,，在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中，它成為不可缺少的工具,。
介紹
牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個，分子量為23300,，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。除存在于脊椎動物外，還存在于蠶,、海盤車,、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中,。另外與高等動物的血液凝固和炎癥癥等有關(guān)的凝血酶,、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系,，可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進(jìn)化過程中分化而來的,。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同,�,！ ∫鹊鞍酌赶底耘！⒀蚧蜇i胰中提取的一種蛋白水解酶,。中國藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計(jì)算,，每1mg 的效價(jià)不得少于2500單位。 由牛,、羊,、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵,。白色或米黃色結(jié)晶性粉末,。溶于水，不溶于乙醇,、甘油,、氯仿和乙醚,。分子量24 000，pI 10.5,，最適pH值7.8～8.5左右,。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用,；重金屬離子,、有機(jī)磷化合物、DFP,、天然胰蛋白酶抑制劑對其活性有強(qiáng)烈抑制,。臨床用于抗炎消腫，工業(yè)上用于皮革制造,、生絲處理,、食品加工等。
作用和用途
蛋白質(zhì)水解酶,，能選擇地水解蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈,，能消化溶解變性蛋質(zhì)，對未變性的蛋白質(zhì)無作用,，因此,，能使膿、痰液,、血凝塊等分解,、變稀，易于引流排除,，加速創(chuàng)面凈化,，促進(jìn)肉芽組織新生，此外還有抗炎癥作用,。臨床上用于膿胸,、血胸、外科炎癥,、潰瘍,、創(chuàng)傷性損傷、瘺管等所產(chǎn)生的局部水腫,、血腫及膿腫等,。噴霧吸入，用于呼吸道疾病,。也可用于治療毒蛇咬傷,。還常用于動物細(xì)胞培養(yǎng)前對組織的處理。
細(xì)胞培養(yǎng)用胰蛋白酶溶液的配制與消毒
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散,。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣,。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 ,、溫度為 37℃ 時(shí),，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷,。因 Ca2+ ,、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ ,、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液,。終止消化時(shí),，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用�,！ �
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中,。攪拌混勻,，置于 4℃ 內(nèi)過夜�,！ �
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌,。然后分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。
介紹
牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個，分子量為23300,，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。除存在于脊椎動物外，還存在于蠶,、海盤車,、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中,。另外與高等動物的血液凝固和炎癥癥等有關(guān)的凝血酶,、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系,，可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進(jìn)化過程中分化而來的,。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同,�,！ ∫鹊鞍酌赶底耘！⒀蚧蜇i胰中提取的一種蛋白水解酶,。中國藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計(jì)算,，每1mg 的效價(jià)不得少于2500單位。 由牛,、羊,、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵,。白色或米黃色結(jié)晶性粉末,。溶于水，不溶于乙醇,、甘油,、氯仿和乙醚,。分子量24 000，pI 10.5,，最適pH值7.8～8.5左右,。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用,；重金屬離子,、有機(jī)磷化合物、DFP,、天然胰蛋白酶抑制劑對其活性有強(qiáng)烈抑制,。臨床用于抗炎消腫，工業(yè)上用于皮革制造,、生絲處理,、食品加工等。
作用和用途
蛋白質(zhì)水解酶,，能選擇地水解蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈,，能消化溶解變性蛋質(zhì)，對未變性的蛋白質(zhì)無作用,，因此,，能使膿、痰液,、血凝塊等分解,、變稀，易于引流排除,，加速創(chuàng)面凈化,，促進(jìn)肉芽組織新生，此外還有抗炎癥作用,。臨床上用于膿胸,、血胸、外科炎癥,、潰瘍,、創(chuàng)傷性損傷、瘺管等所產(chǎn)生的局部水腫,、血腫及膿腫等,。噴霧吸入，用于呼吸道疾病,。也可用于治療毒蛇咬傷,。還常用于動物細(xì)胞培養(yǎng)前對組織的處理。
細(xì)胞培養(yǎng)用胰蛋白酶溶液的配制與消毒
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散,。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣,。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 ,、溫度為 37℃ 時(shí),，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷,。因 Ca2+ ,、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ ,、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液,。終止消化時(shí),，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用�,！ �
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中,。攪拌混勻,，置于 4℃ 內(nèi)過夜�,！ �
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌,。然后分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。
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