木瓜蛋白酶
特點
木瓜蛋白酶papain屬巰基蛋白酶,具有較寬的底物特異性,,作用于蛋白質(zhì)中L-精氨酸,、L-賴氨酸、甘氨酸和L-瓜 氨酸殘基羧基參與形成的肽鍵,。此酶屬內(nèi)肽酶,,能切開全蛋蛋白質(zhì)分子內(nèi)部肽鏈—CO—NH—生成分子量較小的多肽類。 存在于木瓜胚乳中的蛋白酶,。EC3.4.22.2,。作為植物來源的蛋白酶來說,此酶研究進展的最快,。此酶主要是以內(nèi)肽酶的形態(tài)起作用,。活性的產(chǎn)生,,而半胱氨酸殘基是不可缺少的,,所以是硫基蛋白酶的一種,底物的特異性不太嚴格,,分子量為23400,,氨基酸殘基數(shù)212�,! �
木瓜蛋白酶是一種在酸性、中性,、堿性環(huán)境下均能分解蛋白質(zhì)的蛋白酶,。它的外觀為白色至淺黃色的粉末,微有吸濕性。
酪蛋白被木瓜蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光區(qū) 275nm 處有吸收峰,�,! �
木瓜蛋白酶(Papain)簡稱木瓜酶,又稱為木瓜酵素,。是利用未成熟的番木瓜(Carica papaya)果實中的乳汁,,采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)提煉而成的純天然生物酶制品。它是一種含巰基(-SH)肽鏈內(nèi)切酶,,具有蛋白酶和酯酶的活性,,有較廣泛的特異性,對動植物蛋白,、多肽,、酯、酰胺等有較強的水解能力,,同時,,還具有合成功能,能把蛋白水解物合成為類蛋白質(zhì),。溶于水和甘油,,水溶液無色或淡黃色,有時呈乳白色,;幾乎不溶于乙醇,、氯仿和乙醚等有機溶劑。最適合PH值6~7(一般3~9.5皆可),,在中性或偏酸性時亦有作用,,等電點(pI)為8.75;最適合溫度55~65℃(一般10~85℃皆可),,耐熱性強,,在90℃時也不會完全失活;受氧化劑抑制,,還原性物質(zhì)激活,。木瓜蛋白酶由212個氨基酸殘基組成,當用氨基肽酶從N末端水解掉分子中的2/3肽鏈后,,剩下的1/3肽鏈仍保持99%的活性,,說明木瓜蛋白酶的生物活性集中表現(xiàn)在C末端的少數(shù)氨基酸殘基及其所構(gòu)成的空間結(jié)構(gòu)區(qū)域。
木瓜蛋白酶的應用
1.醫(yī)藥工業(yè)應用:
含有木瓜蛋白酶的藥物,,能起到抗癌,、腫瘤、淋巴性白血病,、原菌和寄生蟲 ,、結(jié)核桿菌等,,可消炎、利膽,、止痛,、助消化。治療婦科病,、青光眼,、骨質(zhì)增生、槍刀傷口愈合,、血型鑒別,、昆蟲叮咬等。
2.食品工業(yè)應用:
可利用酶促反應,,使食品大分子的蛋白質(zhì)水解成小分子肽或氨基酸,。用于水解動植物蛋白、制成嫩肉粉,、水解羊胎素,、水解大豆、餅干松化劑,、面條穩(wěn)定劑,、啤酒飲料澄清劑、高級口服液,、保健食品,、醬油釀造及酒類發(fā)酵劑等。有效轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)的利用,,大大提高食品營養(yǎng)價值,,降低成本。有利于人體的消化和吸收,。
3.美容化妝品應用:
將木瓜蛋白酶加入到含有蛋白質(zhì)和油脂的化妝品中,,具有獨特的美白嫩膚、美顏保健,、祛斑除污垢,、促進血液循環(huán)、改善肌膚等功效,,提高產(chǎn)品檔次,。可制成減肥茶,、美容護膚品等,。4.日化品工業(yè)應用:
用于香皂、肥皂,、洗滌劑,、洗衣粉,、洗手液等,,去污力強,,除菌消毒、安全放心,。
5.飼料工業(yè)應用:
用于飼料添加劑,,開發(fā)蛋白源,利于吸收,,提高飼料的利用率,,節(jié)約成本,有助于牲畜消化,,加速生長,。如在豬、牛,、羊,、雞、鴨,、鵝,、魚、蝦等飼料中添加,。還可以作為蔬菜水果高級復合肥料的添加劑,。
6.皮革工業(yè)應用:
利用木瓜蛋白酶制成脫毛劑,鞣制皮革,,具有毛孔細膩,,皮紋光亮效果�,! �
紡織工業(yè)應用:可用于處理羊毛,、蠶蛹脫膠、蠶絲精煉,,能達到手感柔軟,、舒適、抗收縮,、抗張強度等效果,。
7.細胞培養(yǎng):
木瓜蛋白酶在準備細胞培養(yǎng)液(cell culture)的第一步中被用于分離細胞。用酶處理小組織塊10分鐘后,,就可以將連接細胞的細胞外基質(zhì)打斷,;然后再用蛋白酶抑制劑來停止反應,防止木瓜蛋白酶進一步裂解細胞本身,;最后用Pasteur pipette將組織塊打散為單細胞懸浮液,。
8. 免疫學:
在免疫學中,,木瓜蛋白酶可被用于將免疫球蛋白(即抗體)的Fc片段(可結(jié)晶)和Fab片段(抗原結(jié)合)切割開。
產(chǎn)地
在我國,,木瓜種植主要分布在廣西的橫縣和邕寧縣等地,,屬于廣西特產(chǎn)水果,因此,,木瓜蛋白酶生產(chǎn)廠家主要集中在廣西南寧市,,木瓜蛋白酶的生產(chǎn)和研究有將近20年的時間。催化機制木瓜蛋白酶的剪切肽鍵的機制包括:在His-159作用下Cys-25去質(zhì)子化,,而Asn-158能夠幫助His-159的咪唑環(huán)的擺放,,使得去質(zhì)子化可以發(fā)生;然后Cys-25親核攻擊肽主鏈上的羰基碳,,并與之共價連接形成�,;钢虚g體;接著酶與一個水分子作用,,發(fā)生去�,;⑨尫烹逆湹聂驶┒�,。
生產(chǎn)
通常木瓜蛋白酶是以粗制品形式被生產(chǎn),,主要來源是從木瓜樹的果實中提取乳液(latex)后制成的干貨。乳液是通過割果實的頸部進行收集,,或直接在果實上風干,,或滴入容器中。風干后的乳液就是木瓜蛋白酶的粗制品,。若需對其進行進一步的純化以除去雜質(zhì),,就要先溶解粗制品,并用一個標準的過程(政府注冊)進行提純,。純化后的木瓜蛋白酶可以制為干粉或液體,。
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